国家药监局关于发布《化妆品中甲基泼尼松的测定》化妆品补充检验方法的公告（2025年第47号）

化妆品中甲基泼尼松的测定

（BJH 202501）

1 范围

本方法规定了化妆品中甲基泼尼松的测定方法。

本方法适用于膏霜乳类、液体（水、油）类、凝胶类、泥类、贴膜类化妆品中甲基泼尼松的定性和定量测定。

2 原理

样品以乙腈或70%乙腈溶液为溶剂提取，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测。根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性，定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

3 试剂和材料

除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯及以上规格，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

3.1 乙腈，色谱纯。

3.2 正己烷，色谱纯。

3.3 70%乙腈溶液：取乙腈（3.1）、水按体积比7:3混合，摇匀。

3.4 标准品：甲基泼尼松标准品，纯度≥98%。标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量、结构式详见附录A中的表A.1。

3.5 甲基泼尼松标准储备溶液：称取甲基泼尼松标准品10mg（精确到0.0001g），置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度，摇匀。制成标准储备溶液的质量浓度为1000mg/L。置于-20℃冰箱中保存，有效期1个月。

3.6 甲基泼尼松标准溶液：准确移取甲基泼尼松标准储备溶液（3.5）适量，置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈（3.1）配制得质量浓度为10mg/L甲基泼尼松标准溶液。置于-20℃冰箱中保存。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。

4.2 分析天平：感量0.0001g和0.00001g。

4.3 超声波清洗器。

4.4 涡旋混合仪。

4.5 高速离心机。

5 试样制备与保存

样品应按照标签标示的贮存条件进行保存。取样前，应检查封口的完整性，观察样品的性状和特征，并使样品混匀。打开包装后，应尽可能快地取出所要测定部分进行分析，取样后，应将样品进行密封保存。

6 分析步骤

6.1 筛查用标准溶液

取甲基泼尼松标准溶液（3.6）适量，用乙腈（3.1）进行稀释，配制成浓度为2μg/L的筛查用标准溶液。

6.2 标准中间溶液

精密量取甲基泼尼松标准溶液（3.6）1mL，置于50mL容量瓶中，用乙腈（3.1）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为200μg/L的标准中间溶液。

6.3 基质标准系列溶液

称取与待测化妆品配方相同或相近的基质空白样品0.2g（精确到0.001g）5份，置于10mL具塞比色管中，精密量取标准中间溶液（6.2）适量，按照“6.4”的操作步骤处理，配制浓度为2、4、10、20、40μg/L基质标准系列溶液。基质标准系列溶液应临用新制。

6.4 样品处理

6.4.1 膏霜乳类、液体（水）类、凝胶类、泥类、贴膜类样品

称取样品0.2g（精确到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈，涡旋振荡1min至试样分散均匀后，加乙腈（3.1）至近刻度，超声提取20min，静置至室温，用乙腈（3.1）定容至刻度。必要时，以4000 r/min转速离心10 min。取上清液经0.22μm滤膜过滤后，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。

6.4.2 液体（油）类样品

称取样品0.2g（精确到0.001g），置于10 mL离心管中，加入2 mL正己烷（3.2），涡旋振荡1min至试样分散均匀后，加入70%乙腈溶液（3.3）3 mL，涡旋振荡2 min，4000 r/min离心10 min，吸取下层溶液至10 mL具塞比色管中，上层正己烷层用70%乙腈溶液（3.3）3 mL，自“涡旋振荡2 min，…”起，重复上述步骤一次，合并两次溶液，加70%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，混匀，经0.22μm滤膜过滤后，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。

6.5 仪器参考条件

6.5.1 色谱条件

色谱柱：C₁₈柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm），或等效色谱柱；

流动相：A为水，B为乙腈（3.1）。梯度洗脱程序见表1；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：2μL。

表1  梯度洗脱程序

6.5.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI源）；

监测模式：正离子多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表2。

表2  甲基泼尼松监测离子对及相关参数设定

*为推荐的定量离子。

注：当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。

6.6 定性判定

取供试品溶液（6.4）与筛查用标准溶液（6.1）在相同分析条件下测定，样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测成分的特征离子峰保留时间与筛查用混合标准溶液（6.1）对应的保留时间一致，且选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度的筛查用混合标准溶液（6.1）的监测离子对的相对丰度比的最大偏差不超过表3的规定，则可以判定样品中存在对应的组分。

表3  定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差

6.7 定量测定

取基质标准系列溶液（6.3）依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制基质标准曲线，其线性相关系数应大于0.99。

取供试品溶液（6.4）测定，将对应的定量离子对色谱峰面积代入基质标准曲线。按“7”项下公式，计算样品中待测组分的含量。

6.8 平行试验

按以上步骤，对同一样品进行平行实验测定。

6.9 空白试验

除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。

7 结果计算

结果按式（1）计算：

………………………………………… (1)

式中：

ω—样品中甲基泼尼松的质量分数，μg/g；

ρ—供试品溶液中甲基泼尼松的质量浓度，μg/L；

V—样品定容体积，mL；

m—样品取样量，g；

D—稀释倍数（如未稀释则为1）。

在相同条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

8 精密度和准确度

多家实验室验证定量下限浓度回收率为82%～114%，相对标准偏差小于7.0%（n=6），中、高浓度回收率为87%～110%，相对标准偏差小于6.2%（n=6）。

9 检出限和定量限

本方法中甲基泼尼松的检出限、定量下限及取样量为0.2g，定容体积为10mL时的检出浓度和最低定量浓度见表4。

表4  甲基泼尼松的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度

10 图谱

图1 甲基泼尼松标准溶液的多反应监测提取色谱图

附录A

甲基泼尼松的相关信息

表A.1 甲基泼尼松的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、

相对分子质量及结构式

起草单位：黑龙江省药品检验研究院、中国食品药品检定研究院

主要起草人：王常禹、于佳、郭恒、寻延滨、何欢

验证单位：上海市食品药品检验研究院、湖北省药品监督检验研究院、湖南省药品检验检测研究院