保健食品中大蒜素的测定

本方法规定了保健食品中大蒜素（二烯丙基三硫化物）的测定方法。

本方法适用于以大蒜及其加工品为主要原料制成的保健食品中大蒜素（二烯丙基三硫化物）的测定。

2   原理

试样经有机溶剂提取，通过气相色谱检测，以保留时间定性，外标法定量。

3   试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。

3.1　试剂

3.1.1　无水乙醇（C₂H₅OH）。

3.1.2　正己烷（CH₃(CH₂)₄CH₃）。

3.1.3　无水硫酸钠（Na₂SO₄）。

3.2　标准品

大蒜素标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

表1 大蒜素标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量

3.3　标准溶液配制

3.3.1 大蒜素标准储备液（5.0mg/mL）：称取125.0mg大蒜素于25mL容量瓶中，用正己烷（3.1.2）定容至刻度，摇匀。此溶液可在4℃冰箱中保存七天。

3.3.2 大蒜素标准工作液：分别准确吸取不同体积的标准储备液（3.3.1），用正己烷（3.1.2）将其稀释成大蒜素含量分别为0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL的标准系列工作溶液，临用配制。

3.4　材料

微孔滤膜：0.45μm，有机相。

4   仪器和设备

4.1　气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。

4.2　分析天平：感量为0.01mg和0.0001g。

4.3　超声清洗器。

5   分析步骤

5.1　试样制备

5.1.1　固体试样

称取已粉碎混合均匀的固体待测试样适量（含待测组分约5mg，精确到0.0001g）于5mL容量瓶中，加无水乙醇2.5mL，密塞，超声（功率800W，频率40kHz）提取20min，取出冷却至室温，加正己烷定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜过滤，待上机测试用。

5.1.2　油状试样

称取已混合均匀的油状待测试样适量（含待测组分约5mg，精确到0.0001g）于5mL容量瓶中，加正己烷溶解并定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜过滤，待上机测试用。

5.1.3　含水液体试样

精密吸取已混合均匀的待测试样适量（含待测组分约10mg），置于分液漏斗中，加4mL正己烷振摇提取1min，静置分层，取上层清液过无水硫酸钠，提取两次。用适量正己烷冲洗无水硫酸钠，合并至同一10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，摇匀。过0.45μm微孔滤膜过滤，待上机测试用。

5.2　仪器参考条件

5.2.1　色谱柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定相，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm或其他同等性能色谱柱。

5.2.2　柱温箱温度：起始温度100℃保持3min，10℃/min速度升至150℃，再以20℃/min速度升至200℃，保持20min。

5.2.3　进样口温度：220℃。

5.2.4　检测器温度：250℃。

5.2.5　载气：高纯氮气，流量1.0mL/min。

5.2.6　氢气：40mL/min；空气：400mL/min。

5.2.7　进样量：1μL。

5.3　测定

将1μL的标准工作溶液（3.3.2）和试样溶液（5.1）注入气相色谱仪中，以保留时间定性，测得峰面积或峰高，外标法定量。

标准工作溶液图谱及试样溶液图谱见附录A。

6   结果计算

试样中大蒜素含量按下式计算：

式中：

W—大蒜素的含量，单位为克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100mL）；

A₁—试样溶液色谱峰面积或峰高；

A₂—标准工作液峰面积或峰高；

C—标准工作液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V—试样定容体积，单位为毫升（mL）；

m—试样的质量或体积，单位为克或毫升（g或mL）；

100—单位转换；

1000—单位转换。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。

7   精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

附录A

标准溶液和试样溶液典型气相色谱图

图A.1大蒜素标准溶液色谱图

图A.2含有大蒜素的试样溶液色谱图